347 չժանգոտվող պողպատի քիմիական բաղադրությունը երակային կամ մազանոթային արյան մեծությունը, որը հատուկ է SARS-CoV-2-ի, T-բջիջների պատասխաններին, որոշում է իմունիտետը COVID-19-ի նկատմամբ:

Շնորհակալություն Nature.com այցելելու համար:Դուք օգտագործում եք զննարկչի տարբերակ՝ CSS-ի սահմանափակ աջակցությամբ:Լավագույն փորձի համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել թարմացված դիտարկիչ (կամ անջատել Համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում):Բացի այդ, շարունակական աջակցություն ապահովելու համար մենք կայքը ցուցադրում ենք առանց ոճերի և JavaScript-ի:
Սլայդերներ, որոնք ցույց են տալիս երեք հոդված յուրաքանչյուր սլայդում:Օգտագործեք հետևի և հաջորդ կոճակները՝ սլայդների միջով շարժվելու համար, կամ սլայդ կարգավորիչի կոճակները վերջում՝ յուրաքանչյուր սլայդով շարժվելու համար:

347 չժանգոտվող պողպատի քիմիական բաղադրություն

Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակի քիմիական բաղադրություն

Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակի քիմիական կազմը և մեխանիկական հատկությունները հետևյալն են.
- Ածխածին – 0,030% մաքս
- Chromium – 17-19%
Նիկել – 8-10,5%
Մանգան - առավելագույնը 1%

Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակի մեխանիկական հատկություններ

Ըստ Stainless Steel 347 Coil Tube արտադրողի, 347 Coil Tube-ի մեխանիկական հատկությունները.
- առաձգական ուժ (psi) – 75,000 րոպե
- Ելքի ուժ (psi) – 30,000 րոպե
- Երկարացում (% 2″-ում) – 25% րոպե
- Բրինելի կարծրություն (BHN) – 170 առավելագույնը

Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակի կիրառություններ և օգտագործում

• Stainless Steel 347 Coil Tube, որն օգտագործվում է Sugar Mills-ում:
• Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակ, որն օգտագործվում է պարարտանյութում:
• Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակ, որն օգտագործվում է արդյունաբերության մեջ:
• Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակ, որն օգտագործվում է էլեկտրակայաններում:
• Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակ, որն օգտագործվում է սննդի և կաթնամթերքի մեջ:
• Չժանգոտվող պողպատից 347 կծիկ խողովակ, որն օգտագործվում է նավթի և գազի գործարանում:
• Stainless Steel 347 Coil Tube Արտադրող, որն օգտագործվում է ShipBuilding Industry-ում:

Ենթադրվում է, որ SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջները պաշտպանում են վարակից և COVID-19-ի առաջընթացից, սակայն դրա համար ուղղակի ապացույց չկա:Այստեղ մենք համեմատեցինք SARS-CoV-2-ին հատուկ ինտերֆերոն-γ դրական T բջիջների ամբողջական արյան չափումները դրական COVID-19 ախտորոշիչ թեստի արդյունքների հետ (PCR և/կամ կողային հոսք) Լիանի արյունը հավաքելուց հետո 6 ամսվա ընթացքում։148 մասնակիցների շրջանում, ովքեր նվիրաբերել են երակային արյան նմուշներ, SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջների արձագանքի ուժգնությունը զգալիորեն ավելի բարձր է եղել նրանց մոտ, ովքեր մնացել են պաշտպանված, քան վարակվածների մոտ (P <0,0001):Վարակման տոկոս ռիսկ, մինչդեռ բարձր ինտենսիվությունը նվազեցրեց այս ռիսկը մինչև 5.4%:Այս արդյունքները ընդհանրացվել են լրացուցիչ 299 մասնակիցների համար, ովքեր փորձարկել են մազանոթային արյան մասշտաբային վերլուծություն, որը կարող է հեշտացնել բնակչության մասշտաբով T-բջիջների իմունիտետի հասանելիությունը (14,9% ընդդեմ 4,4%):Այսպիսով, SARS-CoV-2-ի համար հատուկ T բջիջների չափումը կարող է կանխատեսել վարակի վտանգը և պետք է գնահատվի անհատի և բնակչության իմունային կարգավիճակը մոնիտորինգի ժամանակ:
SARS-CoV-2 վարակի նկատմամբ իմունային պատասխանի չափումն ու ըմբռնումը կարևոր է ապագա արդյունավետ ռազմավարություններ մշակելու համար՝ նվազագույնի հասցնելու համար ապագա COVID-19 բռնկումների հանրային առողջության և տնտեսական ազդեցությունները:Իմունային փոխկապակցվածության հայտնաբերումը կարևոր տեղեկատվություն կտրամադրի բնակչության վիրուսային վարակի նկատմամբ զգայունության մասին, հնարավոր է վաղ նախազգուշացում հոսպիտալացումների գագաթնակետի մասին, ինչպես նաև թույլ կտա մարդկանց անձամբ կառավարել վարակվելու և ուրիշներին վարակելու ռիսկը:Իմունային հսկողությունն ապացուցել է, որ կարևոր է առողջ և բարձր ռիսկային հիվանդների մոտ COVID-19 պատվաստանյութերի արդյունավետությունը գնահատելու համար1,2,3, հատկապես SARS-CoV-24 մուտանտների դեպքում, և իմունային անբավարարության հայտնաբերումը կնշանակի անձեռնմխելիության բարձրացման անհրաժեշտություն: Պատվաստվեք և կանխեք: ապագա բռնկումները.
Անհատի իմունիտետի մակարդակը SARS-CoV-2 վարակի նկատմամբ կախված է բազմաթիվ գործոններից՝ վիրուսային ծանրաբեռնվածություն ազդեցության պահին, վիրուսի տարբերակներ, տարիք, նախորդ պատվաստումների/վարակի կարգավիճակ, համակցված հիվանդություններ, դեղամիջոցներ և ամենակարևորը՝ հակա SARS-CoV վարակ: .2 հարմարվողական իմունային պատասխանը տեղի է ունենում վիրուսի ազդեցության պահին5:SARS-CoV-2 վարակի և/կամ պատվաստման նկատմամբ իմունային պատասխանի գնահատումը կենտրոնացած է շճաբանական վերլուծությունների վրա, որոնք չափում են կառուցվածքային սպիտակուցի համար հատուկ հակամարմինների առկայությունը (օրինակ՝ հասկ գլիկոպրոտեին):Այնուամենայնիվ, միայն հակամարմինների առկայությունը կամ բացակայությունը ճշգրիտ չի որոշում պաշտպանիչ իմունային պատասխանը, քանի որ պատասխանները զգալիորեն թուլանում են ժամանակի ընթացքում6 և SARS-CoV-2 տարբերակների չեզոքացումը վերականգնվող կամ կրկնակի պատվաստված անհատների մեջ թույլ ակտիվություն, որը կարող է հանգեցնել մեծ բեկումնային վարակների թիվը7.Իրոք, Omicron տարբերակի (B.1.1.529) կողմից առաջացած սիմպտոմատիկ COVID-19-ից պաշտպանությունը նվազել է մինչև 10%՝ mRNA պատվաստումից ընդամենը 4-6 ամիս հետո, թեև ծանր հիվանդությունից պաշտպանությունը պահպանվել է ավելի քան 68% առնվազն 7 ամիս8:Հարմարվողական հիշողության T բջիջների պատասխանների չափումը, որը երկարաժամկետ պաշտպանություն է տալիս վիրուսային վարակից, SARS-CoV-2 վարակի նկատմամբ զգայունության լավագույն ցուցանիշն է և հետևաբար COVID-199-ի համար դրական թեստավորման ռիսկի ավելի լավ ցուցանիշ է, քանի որ հատուկ T. բջիջները կարող են կանխել վարակը:առանց seroconversion10,11.Այնուամենայնիվ, T բջիջների արձագանքների չափումը ավելի քիչ ուշադրություն է դարձվել երակային արյան նմուշներ ստանալու և տեղափոխելու մեթոդաբանական դժվարությունների և նյութատեխնիկական խնդիրների պատճառով, հատկապես պատվաստանյութի արդյունավետությունը գնահատելու և անձեռնմխելիությունը մոնիտորինգի նպատակով մեծ դիտողական հետազոտություններ իրականացնելիս:Այնուամենայնիվ, պատվաստված անհատները ցույց են տալիս ուժեղ T բջիջների ակտիվություն SARS-CoV-2 տարբերակների դեմ՝ պոտենցիալ փոխհատուցելով հակամարմինների ռեակտիվության կորուստը՝ COVID-1912,13-ի ծանրությունը սահմանափակելու համար:
Այստեղ մենք փորձեցինք հասկանալ, թե արդյոք SARS-CoV-2 T բջիջների պատասխանի մեկ չափումը կարող է կանխատեսել SARS-CoV-2 վարակի բացարձակ ռիսկը արյան նմուշառումից հետո 6 ամսվա ընթացքում՝ անկախ իմունային ազդող նախկին գործոններից:Որպեսզի T բջիջների թեստը բարձր թողունակություն և ավելի մեծ ուսումնասիրությունների համար կիրառելի դարձնենք, մենք նաև փորձեցինք թեստը փոքրացնել, որպեսզի այն հնարավոր լինի կատարել մազանոթային մատնահետքի արյան նմուշի միջոցով:
Մենք չափել ենք բջջային և հումորալ իմունային պատասխանները առողջ դոնորների մոտ՝ օգտագործելով SARS-CoV-2 T բջիջների և IgG հակամարմինների համակցված հայտնաբերում՝ հիմնված ամբողջական երակային արյան վրա (մասնակիցների բնութագրերի համար տե՛ս 2022 թ. մարտ 14: Պատվաստված դոնորների մոտ՝ SARS-CoV-2- հատուկ T-բջջային պատասխանները որոշվել են պլազմայում ինտերֆերոն-γ (IFN-γ) մակարդակները չափելով SARS-CoV-2 պեպտիդով ամբողջ արյան խթանումից հետո (ինչպես նախկինում՝ 14,15,16,17,18) և կապված IgG պատասխանների հետ: նուկլեոկապսիդով (N) ավելացել է նրանց մոտ, ովքեր հայտնել են նախորդ վարակի մասին, թեև երկու պատասխաններն էլ ավելի բարձր են եղել նախկինում վարակված չպատվաստված դոնորների մոտ, առավելագույնը՝ մարմնում (նկ. 1ա, բ): ամենաբարձրն են եղել նախկինում վարակված պատվաստված դոնորների մոտ (Նկար 1գ–ե):
SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների պատասխանները չափվել են երակային ամբողջական արյան վերլուծության միջոցով և հիմնվելով մասնակիցների պատվաստումների և SARS-CoV-2 վարակի նախկին կարգավիճակի վրա (հաստատված PCR և/կամ կողային հոսքի թեստով)' Vac + /Inf +' n = 60 (կանաչ), 'Vac + /Inf-' n = 82 (կապույտ), 'Vac-/Inf +' n = 4 (դեղին), 'Vac-/Inf-' n = 1 (չի կիրառվում):SARS-CoV-2-ին հատուկ IgG կապող ռեակցիաների թիրախային նուկլեոկապսիդը («N») (b; ****P <0.0001, **P = 0.0016), ընկալիչին կապող տիրույթ («RBD») (գ; ** P = 0,0022, *P < 0,015), հասկի ենթամիավոր 1 («S1») (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ ընդդեմ Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ ընդդեմ Vac+/Inf-) P = 0.012) և գագաթնակետային ենթամիավորը 2 («S2») (ե) չափվել է երակային ամբողջական արյան թեստերի միջոցով և հիմնվելով մասնակիցների պատվաստումների և նախորդ SARS-CoV-2-ի վրա (հաստատված PCR և/ կամ կողային հոսքի թեստ) վարակիչ կարգավիճակ:'Vac + /Inf +' n = 60 (կանաչ), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (կապույտ), 'Vac-/Inf +' n = 4 (դեղին):Համեմատությունները կատարվել են Kruskal-Wallis թեստի միջոցով, որը ճշգրտվել է Dunn թեստի միջոցով բազմակի համեմատությունների համար:Տվյալները ցուցադրվում են գծապատկերների տեսքով (կենտրոնական գիծ՝ միջինում, վերին սահմանը՝ 75-րդ ցենտիլում, ստորին սահմանը՝ 25-րդ տոկոսը), բեղերով՝ նվազագույն և առավելագույն արժեքներով:Յուրաքանչյուր կետ ներկայացնում է դոնոր:Հում տվյալները տրամադրվում են չմշակված տվյալների ֆայլերի տեսքով:
Արյան նմուշառումից հետո մասնակիցներին խնդրել են ինքնուրույն զեկուցել դրական PCR և/կամ կողային հոսքի թեստի արդյունքները COVID-19-ի համար.եթե մասնակիցների թեստը դրական է եղել 2021 թվականի սեպտեմբերի 1-ից մինչև 2021 թվականի դեկտեմբերի 29-ն ընկած ժամանակահատվածում, ենթադրվում է, որ նրանք վարակված են եղել Delta (B.1.617.2) տարբերակով կորոնավիրուսով և Omicron (B.1.1.529) Հանրային Առողջապահության Ուելսում 2021 թվականի դեկտեմբերի 29-ից հետո, երբ մտահոգության այս տարբերակը դառնում է գերիշխող:148 գնահատելի դոնորների շրջանում մենք արձանագրել ենք վարակի 26,3% (39/148) մակարդակ արյան դոնորությունից հետո 6 ամսվա ընթացքում, որոնցից 38-ը ստացել է COVID-19 պատվաստանյութի երկրորդ կամ երրորդ դեղաչափը (վարակի առաջընթացը տեղի է ունեցել Pfizer/BioNTech-ից հետո ( BNT162b2) mRNA պատվաստանյութ կամ AstraZeneca պատվաստանյութ (ChAdOx1 nCoV-19));վարակվել է նաև չպատվաստված դոնոր.SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ-դրական T բջիջների արձագանքների մեծությունը զգալիորեն ավելի ցածր է եղել նրանց մոտ, ովքեր հայտնել են COVID-19-ի դրական ախտորոշիչ թեստ, քան չվարակված դոնորների մոտ (P <0,0001; Նկար 2ա), հիմնականում պայմանավորված է նրանով. Որոշ մասնակիցների մոտ պատվաստման միջոցով T բջիջների պատասխանների օպտիմալ ինդուկցիա (P = 0,050; Լրացուցիչ Նկ. 1):IFN-γ+ T բջիջների արձագանքի մեծության և COVID-19 թեստի դրական արդյունքի ժամանակի միջև կապ չկար (Լրացուցիչ նկար 2):Ի հակադրություն, ոչ RBD-, S1-, S2-կապող IgG պատասխանները (Նկարներ 2b–d), ոչ էլ RBD-, S1- չեզոքացնող հակամարմինների պատասխանները հատուկ չէին վայրի տիպի կամ դելտա SARS-CoV-2-ի համար (B.1.617):) (Լրացուցիչ նկ. 3) կարող է տարբերակել վարակվելու վտանգի տակ գտնվող մարդկանց:Այնուամենայնիվ, ցածր N-կապակցված IgG արձագանքները SARS-CoV-2-ի դեմ փոխկապակցված են COVID-19 վարակի ռիսկի հետ (P = 0.0084; Նկար 2e);նրանք, ում թեստը դրական է եղել, 85%-ով ավելի քիչ հավանական է (P = 0.00035; ԿԱՄ 0.15, 95):% CI՝ 0,047–0,39 (Լրացուցիչ նկար 4):
Առողջ դոնորների երակային արյան նմուշները (n = 148) գնահատել են SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T-բջջային պատասխանները (ա; ****P <0,0001) և Spike ընկալիչի կապը հատուկ SARS-CoV-ի հետ: -2 խթան.տիրույթ («RBD») (բ), հասկ 1 ենթամիավոր («S1″) (c), հասկ 2 ենթամիավոր («S2») (d) և նուկլեոկապսիդ («N») (e; **P = 0.0084) .Հայտնաբերվել են այն մասնակիցները, որոնց թեստը դրական է եղել COVID-19-ի համար (PCR և/կամ կողային հոսք).բոլոր վարակները տեղի են ունեցել արյան նմուշառումից հետո 6 ամսվա ընթացքում:Համեմատությունները կատարվել են՝ օգտագործելով երկու պոչ Mann-Whitney թեստը:Տվյալները ցուցադրվում են գծապատկերների տեսքով (կենտրոնական գիծ՝ միջինում, վերին սահմանը՝ 75-րդ ցենտիլում, ստորին սահմանը՝ 25-րդ տոկոսը), բեղերով՝ նվազագույն և առավելագույն արժեքներով:Յուրաքանչյուր կետ ներկայացնում է դոնոր:ns-ը կարևոր չէ:F ջերմային քարտեզը ցույց է տալիս Spearman-ի աստիճանի հարաբերակցությունը փոփոխականների միջև նշված տվյալների բազայի համար:Համեմատությունները, որոնք վիճակագրորեն նշանակալի չէին, դուրս մնացին մատրիցից և նշվեցին դատարկ բջիջներով:Հում տվյալները տրամադրվում են չմշակված տվյալների ֆայլերի տեսքով:
Նախադրված 14-ի ախտորոշիչ դրական սահմանը համարվում էր չափազանց կամայական՝ կրկնակի վարակման ռիսկը գնահատելու համար, ուստի սահմանվեցին միջքառորդական միջակայքեր՝ բացարձակ ռիսկի պարամետրեր սահմանելու համար:Վիճակագրական մոդելը, որը ներառում էր միայն արդյունքների վրա զգալի ազդեցություն ունեցող փոփոխականներ, ցույց տվեց, որ SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների արձագանքի մեծությունն ամենակարևոր իմունային բիոմարկերն էր՝ որոշելու անհատի լինելու հնարավորությունները: փորձարկվել է COVID-ի համար։-19 դրական (Նկար 2f և Լրացուցիչ նկար 4):SARS-CoV-2-ի հատուկ IFN-γ+ T բջիջների արձագանքով հիվանդներ երրորդ (194-489 pg/ml IFN-γ) և չորրորդ (>489 pg/ml IFN-γ) քառորդներում 65% (P = 0.055; ԿԱՄ 0,35, 95% CI՝ 0,11–1,00) և 90% (P = 0,0050; ԿԱՄ 0,098, 95% CI՝ 0,014–0,42) ավելի շատ մասնակիցներ են ունեցել:Շանսերը փոքր են (Լրացուցիչ նկար 4):Ընդհանուր առմամբ, SARS-CoV-2-ի հատուկ T բջիջների արձագանքով երակային արյունից ≤79 pg/mL IFN-γ մասնակիցները 6 ամսվա ընթացքում ունեցել են բեկումնային վարակի 43,2% ռիսկ՝ համեմատած 489 pg/mL ավելի բարձր պատասխանի հետ:մլ IFN-γ-ն ուներ 5.4% վարակի վտանգ (աղյուսակ 2):
Ամբողջական երակային արյան ստուգման շրջանակը սահմանափակ է՝ ֆլեբոտոմիստի կողմից նմուշ հավաքելու անհրաժեշտության պատճառով:SARS-CoV-2-ի համար T բջիջների և IgG թեստավորման հասանելիությունը մեծացնելու համար մշակվել է մազանոթային արյան նմուշառման այլընտրանքային մեթոդ, որը թույլ կտա մասնակիցներին մատնահետքերով արյան նմուշներ ստանալ տանը:Մեր գիտելիքներով, նախկինում չեն եղել զեկույցներ մազանոթային արյան նմուշներում հակագենային հատուկ T բջիջների ֆունկցիայի չափման վերաբերյալ:Նախկինում ուժեղ հարաբերակցություն է հայտնաբերվել լիմֆոցիտների քանակի միջև, որոնք ստացվել են համեմատելի մազանոթային և երակային արյան նմուշների միջոցով:Բացի այդ, զեկուցվել է, որ SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջների պատասխանները չափող ամբողջ արյան վրա հիմնված անալիզները օգտագործում են ընդամենը 320 մկլ երակային արյուն20՝ վերացնելով մազանոթ արյան նմուշներում նախածննդային T բջիջների հաճախականության վերաբերյալ մտահոգությունները:
Մենք օգտագործեցինք SARS-CoV-2 T բջիջների և IgG հակամարմինների այս բարձր արտադրողականության ստանդարտացված համատեղ փորձարկումը՝ հիմնված մազանոթային ամբողջական արյան վրա՝ տարբեր ուղեկցող հիվանդություններով և նախնական պատվաստման/վարակման կարգավիճակ ունեցող մասնակիցների բջջային և հումորալ իմունային պատասխանը չափելու համար (Աղյուսակ 1):հավաքագրվել է ամբողջ Մեծ Բրիտանիայից 2022 թվականի հունվարի 24-ից մինչև մարտի 14-ն ընկած ժամանակահատվածում14: Մատների նմուշների մեծ մասը (90,9%) ճիշտ է ստացվել և ուղարկվել լաբորատորիա հավաքագրումից հետո 24 ժամվա ընթացքում:Որոշ դեպքերում նմուշները ստացվել են արյան վերցնելուց հետո 48 ժամվա ընթացքում, սակայն այդ նմուշներից և ոչ մեկը չի անցել որակի վերահսկման ստուգում և չի ազդել T բջիջների կամ հակամարմինների ընդհանուր չափումների վրա (Լրացուցիչ նկար 5):Չնայած SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների արձագանքի մեծության տարբերություններ կային, որոնք չափվում էին համապատասխան մազանոթային և երակային արյան նմուշներում որոշ անհատների մոտ, ընդհանուր առմամբ էական տարբերություններ չկային (P = 0.88; Լրացուցիչ Նկար 6: ))
SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների արձագանքները զգալիորեն ավելացել են պատվաստված անհատների մոտ, ովքեր նույնպես հայտնել են նախորդ վարակի մասին (P = 0,0001), բայց ոչ էապես ավելի բարձր, քան նախկինում վարակված չպատվաստված դոնոր անհատների մոտ (P = 0,19, Նկ. 3ա):)IgG-ի պատասխանները հասկային գլիկոպրոտեինի (RBD, S1, S2) նկատմամբ զգալիորեն ավելի բարձր են եղել պատվաստված դոնորների մոտ, քան չպատվաստված դոնորների մոտ՝ անկախ նախորդ վարակի կարգավիճակից (Նկար 3b-d):Հետաքրքիր է, որ N- կապված IgG-ի միջին արձագանքն ամենաբարձրն էր նախկինում վարակված չպատվաստված մասնակիցների մոտ՝ համեմատած պատվաստված մասնակիցների հետ, թեև դա նշանակալի չէր (Նկար 3e):Չպատվաստված և չվարակված դոնորներից, ովքեր իրենք են հայտարարել, 37 մասնակիցներից 15-ը (40.5%) դրական են եղել N-կապակցված IgG-ի նկատմամբ՝ ավելի բարձր՝ նախկինում սահմանված 2.0 BAU/mL14 շեմից;այս 15 մասնակիցները Այս հիվանդներից 12-ը դրական են գնահատել IFN-γ+ T բջիջների արձագանքը նախկինում սահմանված 22.7 pg/mL IFN-γ14 շեմից բարձր:Հետևաբար, հավանական է, որ այս մասնակիցները նախկինում վարակված են եղել SARS-CoV-2-ով և չեն թեստավորվել COVID-19-ի համար՝ անձնական ընտրության, PCR-ի և/կամ կողային հոսքի սարքավորումների բացակայության պատճառով, կամ եղել են առանց ախտանիշների:Թեև չպատվաստված դոնորների մոտ IFN-γ+ և N-կապակցված IgG մակարդակներին T բջիջների արձագանքների միջև զգալի հարաբերակցություն կար (P = 0.0044; Լրացուցիչ նկար, N-կապակցված IgG արձագանքն ավելի արագ նվազել է, քան N-կապակցված IgG արձագանքը, մինչդեռ IFN-γ + T բջիջների պատասխանները պահպանվեցին՝ անկախ պատվաստման կարգավիճակից, չնայած դոնորների թիվը 50 շաբաթ հետո վիճարկումից հետո ցածր էր (Լրացուցիչ Նկար 8): Պատվաստման տեսակը, ընդհանուր առմամբ, փոքր-ինչ տարբերվում էր SARS-CoV-2, T-ի համար հատուկ դիտարկված IgG պատասխաններում: բջիջները և RBD-ի հետ կապված, չնայած մասնակիցները, ովքեր ստացել են BNT162b2-ի երկու չափաբաժին, որին հաջորդել է mRNA1273 վերապատվաստումը, ցույց են տվել IFN-γ + T բջիջների զգալիորեն ավելի բարձր մակարդակներ SARS-CoV-2-ի նկատմամբ, քան նրանք, ովքեր ստացել են ChAdOx1 և BNT162b2 երկու չափաբաժիններ (Լրացուցիչ Նկ. 9) Բացի այդ, հաղորդված ուղեկցող հիվանդությունները քիչ ընդհանուր տարբերություն ունեին դիտարկված T բջիջների արձագանքներում՝ համեմատած առողջ դոնորների հետ (Լրացուցիչ նկար 10):
SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների պատասխանները չափվել են ամբողջ արյան մազանոթային վերլուծության միջոցով և հիմնված են եղել մասնակիցների պատվաստումների և SARS-CoV-2-ի նախկին վարակիչ կարգավիճակի վրա (հաստատված PCR և/կամ կողային հոսքի թեստով):'Vac + /Inf +' n = 42 (կանաչ), 'Vac + /Inf-' n = 158 (կապույտ), 'Vac-/Inf +' n = 33 (դեղին), 'Vac- /Inf-' n = 37 (մոխրագույն):****P <0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- ընդդեմ Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ ընդդեմ Vac-/Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2-ի հատուկ IgG կապող ռեակցիաներ ցցերի ընկալիչին կապող տիրույթին («RBD») (b; ****P <0.0001, ns. ոչ նշանակալի), հասկի ենթամիավոր 1 («S1») (c; * * **P <0,0001, ns՝ ոչ էական), ցայտային ենթամիավոր 2 («S2″) (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) և նուկլեոկապսիդ («N») (e; ****P <0,0001, ns ոչ նշանակալի) չափվել են երակային ամբողջական արյան անալիզով և հիմնվելով մասնակիցների պատվաստումների և նախկինում SARS-CoV-2-ի (հաստատված PCR-ով և/կամ կողային հոսքի վերլուծությամբ) ինֆեկցիաների վրա. կարգավիճակը։'Vac + /Inf +' n = 46 (կանաչ), 'Vac + /Inf-' n = 182 (կապույտ), 'Vac-/Inf +' n = 34 (դեղին), 'Vac-/Inf-' n = 37 (մոխրագույն):Համեմատությունները կատարվել են Kruskal-Wallis թեստի միջոցով, որը ճշգրտվել է Dunn թեստի միջոցով բազմակի համեմատությունների համար:Տվյալները ցուցադրվում են գծապատկերների տեսքով (կենտրոնական գիծ՝ միջինում, վերին սահմանը՝ 75-րդ ցենտիլում, ստորին սահմանը՝ 25-րդ տոկոսը), բեղերով՝ նվազագույն և առավելագույն արժեքներով:Յուրաքանչյուր կետ ներկայացնում է դոնոր:Հում տվյալները տրամադրվում են չմշակված տվյալների ֆայլերի տեսքով:
Ինչպես նախկինում, մասնակիցներին խնդրեցին հայտնել դրական PCR և/կամ արյան կողային հոսքի արդյունքներ COVID-19-ի համար.Ըստ Մեծ Բրիտանիայի Առողջապահության գործակալության՝ ենթադրվում էր, որ մասնակիցները վարակված են եղել Omicron կորոնավիրուսով (B.1.1.529) վիրուսի դրական տարբերակի փորձարկման պահին, քանի որ այն գերիշխող տարբերակն էր Մեծ Բրիտանիայում հետազոտության ընթացքում:299 գնահատելի դոնորների շրջանում մենք դիտարկել ենք վարակի 8,0% (24/299) մակարդակը մազանոթների նվիրատվությունից հետո երեք ամսվա ընթացքում, որոնցից յոթը չեն պատվաստվել:Բոլոր մասնակիցների շրջանում համակցված հիվանդությունների տեսակարար կշիռն ավելի ցածր է եղել նրանց մոտ, ովքեր դրական են եղել COVID-19-ի համար (10,7%), քան նրանց մոտ, ովքեր բացասական են եղել COVID-19-ի համար (24,4%, Աղյուսակ 1), ինչը կարող է պայմանավորված լինել այն հանգամանքով, որ մասնակիցները որոշակի հիվանդություններն ավելի զգույշ են և պաշտպանում են հնարավոր հետևանքներից, ինչպիսիք են շաքարախտը և քաղցկեղը:Ինչպես նկատվել է երակային արյան խմբի մեջ, SARS-CoV-2-ին հատուկ ինտերֆերոն-γ (IFN-γ) դրական T բջիջները չափվել են այն անհատների մազանոթային արյան նմուշներում, որոնք հայտնել են COVID-19-ի դրական ախտորոշիչ թեստ:Արձագանքման մագնիտուդը զգալիորեն ցածր էր, քան չվարակված դոնորների մոտ (P = 0.034; Նկար 4ա) պատվաստումների և/կամ նախնական վարակի միջոցով T բջիջների արձագանքի համեմատաբար վատ ինդուկցիայի պատճառով (Լրացուցիչ նկար 11):Նմանապես, ոչ RBD-, S1-, S2-կապող IgG պատասխանները (Նկարներ 4b–d), ոչ էլ RBD-, S1- չեզոքացնող հակամարմինների պատասխանները հատուկ չէին վայրի տիպի կամ դելտա SARS-CoV-2-ի համար (B. 1.617):(Լրացուցիչ նկար 12):Հնարավոր է նույնականացնել վարակի ցանկացած նշանակալի ռիսկի ենթարկված անձինք:Ի տարբերություն երակային խմբի, N-ի հետ կապված IgG պատասխանները նույնպես չեն տարբերում COVID-19-ի ռիսկը (Նկար 4e), ինչը ենթադրում է, որ Omicron տարբերակը (B.1.1.529) մեծացնում է իմունային խուսափումը նախկինում վարակված անհատների մոտ, ինչպես վերջերս նկարագրված է 21: Ի հակադրություն, SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ T բջիջների արձագանքի ուժգնությունը կրկին ամենակարևոր փոփոխականն էր COVID-19-ի համար դրական թեստավորման անհատական ​​հավանականությունները որոշելու համար (Նկար 4f):Ընդհանուր առմամբ, SARS-CoV-2-ին հատուկ մազանոթային T-բջիջների արձագանքով ≤23,7 pg/mL IFN-γ մասնակիցները երեք ամսում ունեին վարակվելու 14,9% ռիսկ՝ համեմատած 141,6 pg/mL >141,6 pg/mL:մլ IFN:-γ-ն ուներ 4,4% վարակվելու վտանգ (Աղյուսակ 2):
IFN-γ+ T բջիջների պատասխանները, որոնք հատուկ են SARS-CoV-2-ին (a; *P = 0,034) և SARS-CoV-2-ի հատուկ IgG-ին ուղղված ընկալիչները կապող տիրույթին («RBD») (b), ցայտային ենթամիավոր 1 (' S1') (գ), ցայտի ենթամիավոր 2 ('S2') (դ) և նուկլեոկապսիդների միացման ռեակցիա ('N') (ե):Մասնակիցները, որոնք դրական են ճանաչվել COVID-19 թեստերի համար (PCR և/կամ արյան կողային հոսքի թեստ), բոլոր վարակները տեղի են ունեցել արյան նմուշառումից հետո 3 ամսվա ընթացքում:Համեմատությունները կատարվել են՝ օգտագործելով երկու պոչ Mann-Whitney թեստը:Տվյալները ցուցադրվում են գծապատկերների տեսքով (կենտրոնական գիծ՝ միջինում, վերին սահմանը՝ 75-րդ ցենտիլում, ստորին սահմանը՝ 25-րդ տոկոսը), բեղերով՝ նվազագույն և առավելագույն արժեքներով:Յուրաքանչյուր կետ ներկայացնում է դոնոր:ns-ը կարևոր չէ:F ջերմային քարտեզը ցույց է տալիս Spearman-ի աստիճանի հարաբերակցությունը փոփոխականների միջև նշված տվյալների բազայի համար:Համեմատությունները, որոնք վիճակագրորեն նշանակալի չէին, դուրս մնացին մատրիցից և նշվեցին դատարկ բջիջներով:Հում տվյալները տրամադրվում են չմշակված տվյալների ֆայլերի տեսքով:
Երբ մենք անցնում ենք COVID-19 համաճարակի հաջորդ փուլ, ուշադրությունը կփոխվի կանխարգելումից դեպի անհատական ​​ռիսկերի կառավարում և հասարակության խոցելի անդամների բացահայտում:COVID-19-ի նկատմամբ անձեռնմխելիության հարաբերակցությունների ստեղծումը կարևոր է բարձր ռիսկային այս խմբերն արդյունավետորեն բացահայտելու և բուժելու համար։Այժմ աճող ապացույցներ կան, որ T-բջիջների իմունիտետը պաշտպանում է SARS-CoV-2 վարակից և սահմանափակում COVID-1910-ի ծանրությունը:Այստեղ ներկայացված տվյալները ցույց են տալիս, որ SARS-CoV-2-ին հատուկ IFN-γ+ T բջիջների արձագանքների համակցված ուժը հասկի, թաղանթների և նուկլեոկապսիդային կառուցվածքային սպիտակուցների նկատմամբ ավելի մեծ պաշտպանություն է հաղորդում COVID-19-ից, քան հակամարմինների կապը:19 խթանում կամ չեզոքացնում է պատասխանները: .և պետք է հաշվի առնել անհատական ​​և/կամ հոտի անձեռնմխելիությունը գնահատելիս:ՌՆԹ վիրուսները, ինչպիսիք են SARS-CoV-2-ը կամ գրիպի A վիրուսը (IAV) խուսափում են սերոլոգիական չեզոքացումից՝ արագ զարգացնելով մերկացած B-բջիջների էպիտոպները հակամարմինների կողմից ճանաչված մակերեսային անտիգենների վրա:T բջիջների կողմից տրամադրվող պաշտպանիչ իմունային պատասխանը կարող է արտացոլել վիրուսային սպիտակուցների ավելի պահպանված շրջաններից էպիտոպների թիրախավորումը, որոնք չեն կարող արագ խուսափել իմունային պատասխանից:T բջիջների միջնորդությամբ պաշտպանությունը նոր SARS-CoV-2 տարբերակներից նման է հետերոսուբտիպային պաշտպանությանը, որը միջնորդվում է պահպանված ներքին սպիտակուցների T բջիջների թիրախավորման միջոցով, որը դիտվում է IAV22,23 ենթատիպերում:
Չնայած COVID-19-ին բջջային իմունային պատասխանը չափելու հսկայական ներուժին, համեմատաբար քիչ ուշադրություն է դարձվել ճշգրիտ, բարձր թողունակության, ստանդարտացված T-բջիջների վերլուծությունների մշակմանը:T բջիջների պատասխանների չափման հետ կապված ավանդական բարդությունները և ծախսերը բացառում են T բջիջների իմունիտետի ճշգրիտ որոշումը մեծ պոպուլյացիայի անձեռնմխելիության սքրինինգի ժամանակ:Թեև ամբողջ արյան պեպտիդների խթանման մի քանի առևտրային վերլուծություններ վերջերս հասանելի են դարձել, ներկայումս բոլորը պահանջում են ֆլեբոտոմիստ արյուն ստանալու համար՝ սահմանափակելով հասանելիությունը և մասշտաբը:Մազանոթային արյան համակարգերը լայնորեն օգտագործվում են պոպուլյացիայի մեջ SARS-CoV-2 հակամարմինների տարածվածությունը որոշելու համար:Մենք հարմարեցրինք մազանոթային արյան անալիզները՝ ամբողջ արյան պեպտիդների խթանման փորձարկումներ կատարելու համար՝ գնահատելու T բջիջների ռեակտիվությունը SARS-CoV-2 կառուցվածքային սպիտակուցների և SARS-CoV-2 հատուկ հակամարմինների արձագանքների նկատմամբ:Իրականում, SARS-CoV-2-ի հատուկ հակամարմինների և T բջիջների համակցված չափումը նույն մազանոթ արյան նմուշում շատ գրավիչ է.(iii) բարելավել նյութատեխնիկական ապահովումը և նվազեցնել կրկնօրինակումը, (iv) նվազեցնել շրջակա միջավայրի վրա ազդեցությունը, քանի որ պահանջվում է ավելի քիչ լաբորատոր ծախսվող նյութեր և նմուշների առաքում:Թեև IFN-γ-ի ընդհանուր ռեակտիվությունը նման էր համապատասխան երակային և մազանոթային արյան նմուշների միջև, այն նկատվեց, որ այն ավելի ցածր էր մասնակիցների մազանոթային արյան խմբերում (նկ. 4ա)՝ համեմատած երակային արյան խմբի հետ (նկ. 2ա):IFN-γ արժեքներ Այս բացահայտման համար կան մի քանի բացատրություններ, մասնավորապես՝ մեծ թվով մասնակիցներ, որոնք ուղեկցող հիվանդություններով պահանջում են իմունոպրեսիվ թերապիա, ներգրավվել են մազանոթային արյան նմուշառման խմբի մեջ (Աղյուսակ 1) և անոթներից ստացված T բջիջների կենսունակությունը և/կամ գործառույթը: նմուշները կարող են ցածր լինել, հատկապես հաշվի առնելով նմուշների երկարատև պահպանման պայմանները մինչև պեպտիդային խթանումը:
Ներկայումս լայնորեն հասանելի COVID-19 պատվաստանյութը պատվաստումից հետո 6 ամսվա ընթացքում ստացողների մեծ մասի համար ապահովում է լավագույն պաշտպանությունը ծանր հիվանդություններից8:Հուսադրող է, որ չնայած SARS-CoV-26,7 տարբերակների վատ պատվաստանյութով առաջացած սերոլոգիական չեզոքացմանը, վայրի տիպի SARS-CoV-2-ի դեմ պատվաստման արդյունքում առաջացած T-բջիջների պատասխանները մնացին խիստ ռեակտիվ, քանի որ ի հայտ եկան ևս 25-ը:Տվյալները, որոնք մենք ներկայացնում ենք այստեղ, ցույց են տալիս պատվաստանյութի իմունոգենության ավելի լայն գնահատման կարևորությունը՝ ընդգծելով T-բջիջների անբավարար իմունիտետով պատվաստանյութերը՝ կանխելու հանկարծակի վարակը և վիրուսի համառ փոխանցումը:Մենք նաև նկատեցինք, որ շատ չպատվաստված անհատներ, որոնք հավաքագրվել են մազանոթային կոհորտում, զգալի արձագանք են ունեցել SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջների (և N-կապող IgG) նկատմամբ՝ անկախ նախորդ պատվաստումից, ինչը, հավանաբար, պայմանավորված է նախորդ վարակի պատճառով:Համապատասխան անհատներին պատվաստելու փոխարեն, նրանց վարակվելու ռիսկը պետք է գնահատվի՝ ելնելով նրանց ներկայիս իմունիզացիայի կարգավիճակից և կատարված տեղեկացված ընտրություններից:
Այս հետազոտության սահմանափակումները ներառում են հավաստիացում, որ մասնակիցները արյան հավաքագրումից հետո իրենք զեկուցել են SARS-CoV-2 վարակի մասին՝ իմունիտետի կարևորությունը որոշելու համար.որոշ մասնակիցներ կարող են ունենալ ասիմպտոմատիկ վարակ և չեն կարող անցնել PCR և/կամ կողային հոսքի թեստավորում COVID-19-ի համար:Մեր տվյալների բազայում բացակայում էր նաև արյան նմուշառման ժամանակ մասնակիցների դեղերի մասին տեղեկատվություն:Բացի այդ, հաշվի առնելով, որ մեր բոլոր մասնակիցները հայտնել են միայն թեթև/չափավոր ախտանիշներ կամ ոչ մի ախտանիշ, հնարավոր չեղավ բացահայտել իմունային պատասխանները մեր տվյալների հավաքածուից, որոնք կանխատեսում էին ծանր հիվանդության և հոսպիտալացման բարձր ռիսկ COVID-19-ի համար:Այնուամենայնիվ, CD8+ T բջիջների պատասխանների առկայությունը նուկլեոկապսիդային հատուկ էպիտոպների դեմ վերջերս կապված է ծանր COVID-1926-ից պաշտպանվելու հետ:Բացի այդ, այստեղ օգտագործված վերլուծությունը չի չափել T բջիջների արձագանքը հատուկ վաղ արտահայտված SARS-CoV-2 ոչ կառուցվածքային սպիտակուցներին, որոնք վերջերս պարզվել է, որ նախընտրելիորեն կուտակվում են սերոնեգատիվ բուժաշխատողների մոտ, ովքեր շփվել են վարակված հիվանդների հետ:Ելնելով այս աշխատանքի հիման վրա՝ հաշվի առնելով հավաքագրման պահին համայնքային փոխանցման տարածվածությունը և բնակչության շրջանում կոնտակտային վարակի բարձր հավանականությունը, մեր թեստերում հայտնաբերված SARS-CoV-2 հատուկ T բջիջների թիվը նույնպես կարող է մաքրվել:ենթկլինիկական վարակները մեր խմբերում:Ի վերջո, մենք չենք չափել ինտերլեյկին 2-ի արտադրությունը T բջիջների կողմից, քանի որ մեր նախորդ աշխատանքը ցույց է տվել SARS-CoV-214-ին հատուկ T-բջիջների պատասխանների վատ նույնականացում, թեև IL-2-ին հատուկ պատասխանները կարող են ցույց տալ նախկինում գոյություն ունեցող խաչաձև ռեակտիվություն:բջիջներ, որոնք կապված են SARS-CoV-211 վարակի դեմ պաշտպանության հետ:
Միասին այս տվյալները ընդգծում են երկարաժամկետ երկայնական ուսումնասիրությունների հիմնարար անհրաժեշտությունը, որոնք ներառում են SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջների պատասխանները բնակչության մասշտաբի անձեռնմխելիության չափումների մեջ:Այս ջանքերին կարող են նպաստել նոր մազանոթային արյան թեստի մշակումը, որը չափում է T-բջիջների արձագանքը:
Հետազոտական ​​նախագիծը մասնակիցներին հավաքագրել է 2021 թվականի փետրվարից մինչև 2022 թվականի մարտ ամիսը: Առողջ դոնորների խումբը (n = 148), ովքեր նվիրաբերել են երակային արյան նմուշներ, հիմնականում բաղկացած է եղել համալսարանի անձնակազմից և ուսանողներից, ովքեր մասնակցում են Քարդիֆի համալսարանի COVID-19 սկրինինգ ծառայությանը կամ տարրական դպրոցի աշխատակիցներին: Քարդիֆ.Բոլոր մասնակիցներն այլ կերպ առողջ էին և չէին հաղորդում իմունոպրեսիվ դեղամիջոցներ ընդունելու մասին (տես Աղյուսակ 1-ի բնութագրերը):Մազանոթային արյան նմուշներ հանձնած մասնակիցների խումբը ներառում էր բոլոր կամավոր դոնորները (18+ տարեկան) ամբողջ Մեծ Բրիտանիայից:2022 թվականի հունվարի 24-ից մարտի 14-ն ընկած ժամանակահատվածում հետազոտությանը ներգրավվել է 342 մասնակից, որոնցից 299-ը լաբորատորիա են ներկայացրել արյան նմուշներ։Շատ մասնակիցներ մնացել են չպատվաստված և/կամ հայտնել են լուրջ ուղեկցող հիվանդությունների մասին, ներառյալ աուտոիմուն հիվանդությունները և քաղցկեղը (տես Աղյուսակ 1-ի բնութագրերը):Այս ուսումնասիրությունը ստացել է էթիկական հավանություն Նյուքասլի և Հյուսիսային Թայնսայդի 2 Հետազոտական ​​էթիկայի հանձնաժողովի կողմից (ID IRAS: 294246) և Քարդիֆի համալսարանի Բժշկության հետազոտական ​​​​էթիկայի հանձնաժողովի կողմից (SREC ref. SMREC 21/01):Բոլոր մասնակիցները տվել են գրավոր տեղեկացված համաձայնություն նախքան ընդգրկումը:Մասնակիցները որևէ փոխհատուցում չեն ստացել այս հետազոտությանը մասնակցելու համար:
Երակային արյան նմուշները ստացվել են երակային պունկցիայի միջոցով 6 կամ 10 մլ լիթիումի կամ նատրիումի հեպարինի վակուտաներներում (BD):Մազանոթային արյան նմուշները ստացվել են մատի լանցետով և այնուհետև հավաքվել հեպարինի միկրոկոնտեյներներում (BD):Պահանջվում է նվազագույնը 400 մկլ արյուն;Այս քանակից պակաս ցանկացած նմուշ կմերժվի:Նմուշի մերժման այլ պատճառներ ներառում էին զանգվածային կոագուլյացիա և/կամ հեմոլիզ և անալիզի համար մածուցիկ պլազմա հավաքելու ձախողում (Լրացուցիչ նկար 5):Հակամարմինների պատասխանները գնահատելու համար հասանելի են եղել ընդհանուր 299 մազանոթ արյան նմուշներ, որոնցից 270 նմուշները հասանելի են եղել նաև T բջիջների պատասխանները գնահատելու համար:
SARS-CoV-2-ի հատուկ T բջիջների պատասխանները գնահատվել են՝ օգտագործելով COVID-19 Immuno-T վերլուծությունը (ImmunoServ Ltd) և կատարվել են ինչպես նախկինում նկարագրված14:Հակիրճ, յուրաքանչյուր մասնակցից վերցվել է մեկ 6 մլ կամ 10 մլ նատրիումի հեպարինի (BD) երակային վակուտաներ և մշակվել լաբորատորիայում արյան հավաքագրումից հետո 12 ժամվա ընթացքում:Չնայած նմուշների մեծ մասը մշակվել է 24 ժամվա ընթացքում, մեկ 400–600 մկլ հեպարինացված միկրոարյունահոսող (BD) մազանոթ արյուն է հավաքվել 48 ժամվա ընթացքում:Երակային և/կամ մազանոթային արյան նմուշները գրգռվել են SARS-CoV-2-ի (վայրի տիպի տարբերակ) հատուկ պեպտիդային լողավազաններով, ինչպես նախկինում նկարագրված է14:Այս պեպտիդային գրադարանը պարունակում է 420 15-մեր հաջորդականություններ՝ 11 համընկնող ամինաթթուներով, որոնք ընդգրկում են ամբողջ հասկի սպիտակուցը (S1 և S2) (S; NCBI սպիտակուց՝ QHD43416 1), նուկլեոկապսիդային ֆոսֆոպրոտեին (NP; NCBI սպիտակուց՝ QHD43423 թաղանթապրոպրոտեին և գլիկոպրոտեին): NCBI սպիտակուց՝ QHD43419 1) կոդավորող հաջորդականություններ (որը նշված է որպես «S-/NP-/M-համակցված պեպտիդային գրադարան»):Բոլոր պեպտիդները մաքրվել են մինչև 70%, լուծարվել են ստերիլ ջրի մեջ և օգտագործվել 0,5 մկգ/մլ մեկ պեպտիդում վերջնական կոնցենտրացիայի դեպքում:Նմուշները ինկուբացվել են 37°C ջերմաստիճանում 20-24 ժամ:Այնուհետև խողովակները ցենտրիֆուգվել են 5000×g-ով 3 րոպե և յուրաքանչյուր արյան նմուշի վերևից հավաքվել է ~150 մկլ պլազմա:Պլազմայի նմուշները պահեք -20°C ջերմաստիճանում մինչև մեկ ամիս՝ ցիտոկինի/հակամարմինների հայտնաբերման փորձարկումներ կատարելուց առաջ:
IFN-γ-ը չափվել է IFN-γ ELISA MAX Deluxe հավաքածուի միջոցով (BioLegend, կատալոգի համարը 430116) և կատարվել է արտադրողի ցուցումների համաձայն:Անմիջապես կանգառային լուծույթի ավելացումից հետո (2N H2SO4), միկրոսալը կարդացվել է 450 նմ-ով, օգտագործելով BioLegend Mini ELISA ափսեի ընթերցիչը:IFN-γ-ը քանակականացվել է ստանդարտ կորի էքստրապոլյացիայի միջոցով՝ օգտագործելով GraphPad Prism:Վերլուծության հայտնաբերման ստորին սահմանից ցածր արժեքները գրանցվել են որպես 7,8 պգ/մլ, վերլուծության վերին հայտնաբերման սահմանից բարձր արժեքները գրանցվել են որպես 1000 պգ/մլ:
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG հակամարմինները չափվել են Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex վահանակի միջոցով (Bio-Rad, կատ. համար. 12014634) և պիտակավորվել՝ համաձայն արտադրողի հրահանգները.հրահանգներ.Նմուշների հաշվետվության արժեքները քանակական սահմանից բարձր վերավերլուծվել են 1:1000 նոսրացումով:Բշտիկների միջին ֆլուորեսցենտային ինտենսիվությունը չափվել է Bio-Plex 200 գործիքի վրա (Bio-Rad):Հակամարմինների կոնցենտրացիաները հաշվարկվել են VIROTROL SARS-CoV-2 մեկ հսկողության վերլուծությամբ (Bio-Rad) և փոխակերպվել ԱՀԿ/NIBSC 20/136 Միջազգային տեղեկատու ստանդարտ միավորների (BAU/mL)՝ օգտագործելով արտադրողի տրամաչափման գործակիցը:
RBD և S1 ենթամիավորներին հատուկ չեզոքացնող հակամարմինները SARS-CoV-2 վայրի տիպի և դելտա (B.1.617) SARS-CoV-2 գծերի դեմ չափվել են՝ օգտագործելով Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio): -Ռադ, մաս 12016897), ըստ արտադրողի ցուցումների։Չափել միջին ֆլյուորեսցենտային ինտենսիվությունը Bio-Plex 200 (Bio-Rad) վրա և հաշվարկել տոկոսային արգելակումը (այսինքն՝ չեզոքացում)՝ օգտագործելով հետևյալ բանաձևը.
SARS-CoV-2-ի վարակիչ չեզոքացման փորձարկումները կատարվել են ինչպես նախկինում նկարագրված28:Հակիրճ, վայրի տիպի SARS-CoV-2-ի 600 PFU ինկուբացվել են պլազմայի 3 անգամ սերիական նոսրացումներով կրկնօրինակով 1 ժամ 37°C-ում:Այնուհետեւ խառնուրդը ավելացվել է VeroE6 բջիջներում 48 ժամով:Միաշերտերը ֆիքսվել են 4% պարաֆորմալդեհիդով, թափանցել 0,5% NP-40-ով և 1 ժամ ինկուբացվել արգելափակող բուֆերում (PBS պարունակում է 0,1% թվիեն և 3% յուղազրկված կաթ):Առաջնային հակամարմինը (հականուկլեոկապսիդ 1C7, Stratech) ավելացվել է արգելափակող բուֆերին 1 ժամով սենյակային ջերմաստիճանում:Լվացքից հետո երկրորդական հակամարմին (հակամկան IgG-HRP, Pierce) ավելացվել է արգելափակող բուֆերին 1 ժամով:Միաշերտերը լվացվեցին, մշակվեցին Sigmafast OPD-ի միջոցով և կարդացվեցին Clariostar Omega ափսեի ընթերցողի վրա:Առանց վիրուսի, առանց վիրուսի, բայց առանց հակամարմինների, և միջանկյալ ակտիվություն ցուցաբերող նորմալացված շիճուկները ներառվել են յուրաքանչյուր փորձի մեջ որպես հսկիչ:
Վիճակագրական վերլուծությունն իրականացվել է GraphPad Prism-ում (տարբերակ 9.4.1):Տվյալների հավաքածուի նորմալությունը ստուգվել է Shapiro-Wilk թեստի միջոցով:Բոլոր համեմատությունների համար օգտագործվել են ոչ պարամետրային չափանիշներ:Mann-Whitney թեստը օգտագործվել է չզուգակցված նմուշների համար:Բոլոր թեստերը եղել են երկկողմանի՝ P ≤ 0,05 անվանական նշանակության շեմով:
Հավաքածուի նախնական հետախուզական վերլուծությունը կատարվել է R-ում (տարբերակ 4.0.3):Սա ներառում է Սփիրմանի միակողմանի աստիճանի հարաբերակցության մատրիցայի մշակումը, որտեղ երկու փոփոխականների հարաբերակցությունը ներկայացված է քառակուսիների չափով և գույնով։Ասոցիացիաների միջև վիճակագրական նշանակությունը հաշվարկվել է Spearman's rho-ի միջոցով, որտեղ ≤0.05 արժեքները համարվել են նշանակալի:Համեմատությունները, որոնք վիճակագրորեն նշանակալի չէին, դուրս մնացին մատրիցից և նշվեցին դատարկ բջիջներով:P-արժեքները ճշգրտվել են բազմաթիվ համեմատությունների համար՝ օգտագործելով Հոլմի ուղղումը:Երկուական լոգիստիկ ռեգրեսիայի մոդելը օգտագործվել է տվյալների հավաքածուի փոփոխականների ազդեցությունը COVID-19-ին դրական արձագանքի վրա մոդելավորելու համար:IFN-γ T բջիջների պատասխանները և հակա-RBD/S1/S2/N IgG տիտրերի միավորները վերածվել են գործոնների, որտեղ յուրաքանչյուր անհատ նշանակվել է համապատասխան քառորդ յուրաքանչյուր միավորի համար:Դրանից հետո մշակվել է նախնական հետազոտական ​​մոդել՝ օգտագործելով glm ֆունկցիան վիճակագրական փաթեթում (V4.0.3):Այս սկզբնական մոդելից ստացված հավանականության գործակիցները հանվել են մոդելի գործակիցներից՝ օգտագործելով «odds_plot» ֆունկցիան OddsPlotty փաթեթում (V1.0.2):Խաչաձև վավերացման մոդելը մշակելիս մենք օգտագործեցինք «bestglm» ֆունկցիան bestglm փաթեթից (V0.37.3)՝ սահմանափակելու օգտատերերի կողմնակալությունը և ապահովելու, որ հնարավոր լինի ընտրել գուշակողների լավագույն ենթախումբը:Ընտրված մեթոդը «սպառիչ» էր, և մոդելի համապատասխանությունը գնահատելու համար օգտագործված տեղեկատվական չափանիշը AIC-ն էր:Վերևում նկարագրված նույն աշխատանքային հոսքը օգտագործվել է հավանականությունների հարաբերակցությունը ստանալու համար:
Ուսումնասիրության նախագծման վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկությունների համար տե՛ս այս հոդվածին կից Բնության ուսումնասիրության ամփոփագիրը:
Նամակները և նյութերի հարցումները պետք է ուղղվեն դոկտոր Մարտին Սկարին կամ պրոֆեսոր Էնդրյու Գոդկինին:Այս հոդվածը տրամադրում է բնօրինակ տվյալները:
Վիճակագրական մոդելներ ստեղծելու համար օգտագործվող R կոդը հասանելի է հանրությանը առանց պահանջի29:Վերատպման տեղեկությունները և արտոնագրերը կարելի է գտնել www.nature.com/reprints կայքում:
Munro, APS et al.COVID-19 յոթ պատվաստանյութերի անվտանգությունն ու իմունոգենությունը որպես երրորդ դոզան (խթանիչ) ChAdOx1 nCov-19 կամ BNT162b2 (COV-BOOST) երկու չափաբաժիններից հետո Մեծ Բրիտանիայում. 2-րդ փուլ, կույր, բազմակենտրոն, պատահական, վերահսկվող փորձարկում:Lancet 398, 2258–2276 (2021):
Stewart, ASV et al.Միացյալ Թագավորությունում mRNA, վիրուսային վեկտորների և սպիտակուցային օժանդակ պատվաստանյութերի միջոցով COVID-19 (Com-COV2) դեմ հետերոլոգ առաջնային պատվաստումների իմունոգենություն, անվտանգություն և ռեակտոգենություն. փուլ 2, մեկ կույր, պատահական փորձարկում, ոչ թերարժեքության թեստ:Lancet 399, 36–49 (2022):
Lee, ARIB et al.COVID-19-ի պատվաստանյութերի արդյունավետությունը իմունային անբավարարված հիվանդների մոտ. համակարգված վերանայում և մետա-վերլուծություն.BMJ 376, e068632 (2022):
Dejnirattisai, W. et al.SARS-CoV-2 միկրոն տարբերակի B.1.1.529-ի չեզոքացման նվազում իմունիզացիայից հետո շիճուկով:Lancet 399, 234–236 (2022):
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y և Baliser RD բեկումնային վարակ SARS-CoV-2 պատվաստված անձանց մոտ. չափումներ, պատճառներ և հետևանքներ:Իմունոլոգիայի ազգային քահանա.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021 թ.):
Levin, EG et al.Թուլացած իմունային հումորալ արձագանքը BNT162b2 Covid-19 պատվաստանյութին 6 ամսով:N. eng.J. Բժշկություն.385, e84 (2021):
Carreño, JM et al.SARS-CoV-2 Omicron-ի դեմ ապաքինման և պատվաստանյութի շիճուկների ակտիվությունը.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Կատարի mRNA պատվաստանյութի պաշտպանության տևողությունը SARS-CoV-2 Omicron BA.1 և BA.2 ենթատեսակների դեմ:medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022 թ.):
Tai, MZ et al.Հիշողության B բջիջների հաճախականությունը նվազում է COVID-19 դելտա պատվաստանյութի բեկումնային վարակի հետ:Մոլեկուլային բժշկություն EMBO.14, e15227 (2022):
Kundu, R. et al.Խաչաձև ռեակտիվ հիշողության T բջիջները կապված են COVID-19 կոնտակտները SARS-CoV-2 վարակից պաշտպանելու հետ:Ազգային կոմունա.13, 80 (2022):
Geurtsvan Kessel, CH et al.Տարբերակիչ SARS CoV-2 օմիկրոն-ռեակտիվ T բջիջների և B բջիջների արձագանքները COVID-19 պատվաստանյութ ստացողների մոտ:գիտությունը։Իմունոլոգիա.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022):
Գաո, Յու և այլք:Ժառանգված SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջները խաչաձեւ ճանաչում են Omicron տարբերակները:Ազգային բժշկություն.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Ամբողջ արյունից SARS-CoV-2-ին հատուկ T բջիջների չափումը բացահայտում է ասիմպտոմատիկ վարակը և պատվաստանյութի իմունոգենությունը առողջ անհատների և պինդ օրգանների քաղցկեղով հիվանդների մոտ Իմունոլոգիա https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021):
Tan, AT et al.SARS-CoV-2-ի հասկի T բջիջների արագ չափում պատվաստված և բնական վարակված անհատների ամբողջ արյան մեջ:J. Կլինիկական.ներդրումներ կատարել.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021):
Tallantyre, EU et al.COVID-19 պատվաստանյութի արձագանքը բազմակի սկլերոզի հիվանդների մոտ.տեղադրել.Նեյրոններ.91, 89–100 (2022)։
Bradley RE et al.Մշտական ​​COVID-19 վարակը Wiskott-Oldrich համախտանիշով անհետացել է թերապևտիկ պատվաստումից հետո.J. Կլինիկական.Իմունոլոգիա.42, 32–35 (2022):